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            免疫球蛋白ELISA试剂盒在使用中有何要领可言

            发布时间: 2021-12-26  点击次数: 137次
             
              免疫球蛋白ELISA试剂盒用于小鼠生物样品中IgE定量测量的体外酶联免疫吸附测定(ELISA)。在该测定中,样品中存在的IgE与吸附到聚苯乙烯微量滴定孔表面的抗IgE抗体反应。通过洗涤除去未结合的蛋白质后,加入与辣根过氧化物酶(HRP)缀合的抗IgE抗体。这些酶标记的抗体与先前结合的IgE形成复合物。在另一洗涤步骤之后,通过加入显色底物3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)测定与免疫吸附剂结合的酶。
              本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠免疫球蛋白E(IgE)水平。用纯化的小鼠免疫球蛋白E(IgE)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入免疫球蛋白E(IgE),再与HRP标记的免疫球蛋白E(IgE)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成醉终的黄色。颜色的深浅和样品中的免疫球蛋白E(IgE)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠免疫球蛋白E(IgE)浓度。
              免疫球蛋白ELISA试剂盒的使用要领:
              1、操作严格按照说明书进行,本试剂不同批号组分不得混用。
              2、试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
              3、浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
              4、封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
              5、底物请避光保存。
              6、试验结果判定必须以酶标仪读数为准,使用双波长检测时,参考波长为630nm
              7、所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸,使用时必须注意安全。
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